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    任選式自動生化分析儀分析參數設置原則
    雙擊自動滾屏 發布者:admin        發布時間:2009/6/18        閱讀:10954

    任選式自動生化分析儀分析參數設置原則

    山西亞森實業有限公司  郭永紅

    著名儀器公司自己生產常用項目試劑盒、定標液(定值血清型標準液)與定值質控血清,提供30種左右常用項目的分析參數,供用戶直接使用。另外還有數十個空白項目參數表,由用戶自己開發新項目。有的公司自己不提供試劑盒,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析參數。因此,在購買儀器時必須購買一定數量指定試劑公司的試劑盒(包括定標液與定值質控血清)。小型儀器公司既不生產試劑盒,也沒有合作試劑公司,分析參數表是空的,需要用戶自己設計分析參數,因此難度很大。不過國內代理商一般提供他們的設計參數,往往個別參數不恰當,用戶自己應逐條核實。

    1.最好使用廠家的原裝參數

    11原裝分析參數不應修改,僅計量單位要選用我國法定單位。用原公司指定的試劑盒、定標液與定值質控血清作室內質量控制,除非分析儀沒有調試好或有故障,一般能一次通過。

    12不同公司的定標液在定值時所用原始標準的來源不同,其定值可以稍有差異。方法學相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標液或用水劑標準液作儀器定標,使用非指定試劑盒作質控,測得的數值與質控血清的的預計值會有差異,這種情況不表示原裝分析參數不合適。

    13國產試劑盒的產品質量已大有提高,可選擇方法學相同的優質國產試劑盒與原公司指定試劑盒作并行檢測,實驗樣品應包括低值和高值,結果作相關分析。符合要求的可以使用。少數項目的方法學沒有符合要求的國產試劑盒,只有另行安排該項目的國產試劑分析參數。但原參數要保留或備份,等待合格的國產試劑盒出現。

    14不論用原公司或國產試劑盒,原分析參數不應隨意修改,尤其是主要參數;如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時間、延遲時間、檢測時間,因為這些參數一旦改變,線性范圍和各種限額參數都將發生改變,嚴重影響測定結果的準確性。

    15雙試劑兩步法的方法學有很多優點,如果分析儀為雙試劑式,最好用雙試劑兩步法。

    16底物耗盡參數不能刪去,否則高濃度結果出現低值;線性范圍如果刪去,高濃度結果也會偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變質試劑。

    2.設計分析參數的原則

    如果儀器公司不提供分析參數或測定項目的方法學不同,可以自己設置分析參數。主要設計以下幾個參數。

    樣本試劑比例。                         計算因子。

    孵育時間。                              耗盡限額。

    延遲時間。                              線性度。

    監測時間。                            線性范圍。

    試劑吸光度上下限。

    以上這些參數試劑盒說明書一般都會提供,可按此填入分析參數表,定標后即可進行日常工作,有些參數在以后的工作中逐步修正。

    3.檢測試劑合理有序排列,能減少探針攜帶誤差,提高檢測結果的準確度

    3.1  終點反應 

    311PH值改變:反應物之間,反應物緩沖液之間因攜帶誤差而使pH值改變,反應達不到終點。如雙縮脲法測血清總蛋白,若其他條件相同,反應在堿性(pH89)條件時,蛋白肽鍵(—CONH)才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應,完全測出血清蛋白的總量。若pH8時,總蛋白測定結果偏低,直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結果。

    312緩沖液混入反應物:磷酸鹽緩沖液混入無機磷試劑,會使檢測結果偏高。應將含有磷酸鹽緩沖液的檢測項目放于無機磷后檢測。如GOD-POP法測GLU

    3.2 速率法反應 

    3.2.1輔酶結構:輔酶參與反應時,其還原型、氧化型在340nm處曲線變化是相悖的,由攜帶誤差使上升反應或下降反應不徹底,導致無效值出現。

    3.2.2最適pH值:酶活力測定在最適pH值時,反應最快,靈敏度最高,但是因為緩沖能力有限,可因攜帶誤差使酶促反應出現無效值。大多數酶反應pH值在6.07.5之間;ALPγ-GTLDH須在堿性條件下最適宜。

    3.2.3 反應物間的作用 

    3.2.3.1CK檢測不應在ALPCa檢測之間,因CK反應液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,結合Ca而使結果偏低。

    3232ALTAST反應液中均含有LDH,可干擾LDH檢測結果。

    3233Cho,Glu,UA,HBDHPBS緩沖液,干擾無機磷測定。

    3234BUN酶法測定因谷氨酸脫氫酶(GLDH)消耗NADH,不易放在底物NADHALTAST項目前檢測。

    3235同時測定一個項目的不同標本(血、尿、腦脊液等):應將不同標本放入不同通道測定。臨床生化檢測應注重試劑的合理排序,嚴格按規程操作,及時清除試劑瓶口處結晶,以免導致試劑水平檢測錯誤;對于穩定性差的試劑盡量減少與空氣接觸面積;有沉淀、變渾濁及顏色異常改變的試劑及時更換,盡量清除無效值,提高生化檢測的實效性;為臨床診斷發揮其應有的作用。

    4一般先做孵育時間長的終點法,后做監測時間短的速率法,以便恒速打印綜合報告單。

     

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